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細胞中的微絲染色及微絲與細胞形態的實驗觀察

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-07-08

一、成纖維細胞微絲的染色及其對細胞松馳素B的反應
(一)原理
微絲普遍存在于多種細胞,對細胞的形狀和運動有一定作用。細胞松馳素B可與微絲的亞單位肌動蛋白結合,從而破壞微絲,改變細胞的形狀。
(二)細胞松馳素B處理成纖維細胞與染色觀察
1.在平皿中有三張成纖維細胞貼壁生長的蓋片,在超凈工作臺內將一張蓋片移入另一皿中繼續培養,用作對照。
2.在有兩片的平皿內加100μg/ml的細胞松弛素B 4滴繼續培養半小時。
3. 將用細胞松弛素B處理過的兩張蓋片取一張做染色處理,另一張用培養液洗五次(在平皿內換五次培養液,每次都要搖動),繼續培養、觀察。兩小時后細胞形狀恢復,接近正常。
4.對恢復的蓋片與第一張沒用藥的蓋片一同做染色處理。
5.染色處理
①將需染色的蓋片放入盛有PBS的平皿內用吸管輕輕吹洗蓋片,換液三次,每次3分鐘,洗去培養液。
②將蓋片移入2%Triton X一100液,置37℃恒溫箱內處理20~30分鐘,以提取骨架以外的蛋白質,使骨架圖像清晰。
③立刻將蓋片移入M一緩沖液,換洗三次,每次3分鐘。M一緩沖液有穩定細胞骨架的作用。
④將蓋片移入3%戊二醛固定15分鐘。
⑤將蓋片移入0.2%考馬斯亮蘭染液中,染色15分鐘。然后小心地用自來水沖洗,空氣干燥。
(三)結果
光鏡觀察,微絲聚集成的張力纖維束被染成藍色。在沒用藥的標本上,成纖維細胞多數有突起,微絲沿突起規則排列;用細胞松馳素B處理的標本,由于微絲被破壞突起縮回,多數細胞形狀變圓;用藥處理后又洗去藥的標本,由于解除了藥的作用,肌動蛋白重新聚臺形成微絲,細胞形狀恢復正常。
二、麗藻細胞內胞質環流及其對細胞松弛素B的反應
(一)原理
麗藻細胞大,整個細胞的中央為大液泡占據。靠近液泡是一層溶膠樣流動的內質,在內質與質膜之間,為靜止的外質,其中含有葉綠體。內質中含有許多顆粒,可以清楚地看到胞質環流。在麗藻細胞中的微絲與胞質環流有密切關系。成束的微絲出現在外質與內質接口(溶膠和凝膠接口)并交織一起,與環流方向平行。用細胞松弛素B處理后,就可抑制胞質的環流運動。
(二)方法
1.剪下一小塊麗藻葉片(1~2cm),置于載片上,蓋上蓋片。
2.觀察(陽光充足時效果較好)。
3.再取一塊麗藻葉片,滴一滴細胞松弛素B,10~15分鐘后蓋上蓋片,觀察。
4.洗去藥物,再觀察。
(三)結果
在麗藻內質中可以看到胞質環流,用細胞松弛素B處理后,胞質環流停止,洗去藥物,又出現胞質環流。
三、微絲的電鏡照片觀察
恒河猴脊髓內神經纖維中微絲電鏡照片,可見微絲是實心結構,直徑5~8cm,它均勻地分散于細胞基質中,或排列成束和網狀。

 
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