一、試劑盒

1、抗原、抗體活性對效價的影響：主要是試劑中抗體(或抗原)的效價降低或失活，結果不易判斷。再有ELISA法靈敏度高，對雜質的反應靈敏度也高，實驗中空白對照OD值偏高或假陽性;

2、酶結合物濃度過高，也會導致OD值假性增高。

二、試驗儀器

1、ELISA試劑盒加樣器是否經過校正，酶免測定血清用血量很少，如手工加樣器的性能不好，吸取樣品不，會使結果忽高忽低;

2、每次洗板前，應檢查洗板機針孔有無堵塞。

三、操作

1、檢測前先將試劑盒從冰箱取出置室溫平衡20min后使用，試劑用完及時放回冰箱冷藏，以免造成試驗結果假性降低;

2、加樣時注意勿觸及包被板底部，以免擦傷包被物使抗體(抗原)脫落而影響實驗結果的準確性;

3、洗滌不充分，會使結果假性增高，過分洗滌呈假陰性;

4、比色時應保持包被孔底部無異物、無水汽，特別是冬季板從37℃水浴箱取出時，底部留有水汽，應將板底擦干后進行比色，水汽或孔內氣泡也會使OD值升高;

5、抗原與抗體反應達到平衡，依賴于溫度與時間。溫度高于45℃易引起失活及標記物脫落，溫度低于4℃，影響反應速度。