成分：
　　蛋白胨　　　　　　1g
　　氯化鈉　　　　　　5g
　　葡萄糖　　　　　　1g
　　磷酸二氫鉀　　　　2g
　　0.4%酚紅溶液　　　3mL
　　瓊脂　　　　　　　20g
　　蒸餾水　　　　　　1000mL
　　20%尿素溶液　　　 100mL
　　pH7.2±0.1
制法：將除尿素和瓊脂以外的成分配好，并校正pH，加入瓊脂，加熱溶化并分裝燒瓶。121℃高壓滅菌15min。冷至50～55℃，加入經除菌過濾的尿素溶液。尿素的最終濃度為2%，最終pH應為7.2±0.1。分裝于滅菌試管內，放成斜面備用。
試驗方法：挑取瓊脂培養物接種，在36±1℃培養24h，觀察結果。尿素酶陽性者由于產堿而使培養基變為紅色。