成分：　　鄰硝基酚β－D-半乳糖昔(ONPG)　　　　　　　 60mg
　　(O－Nitrophenyl－β－D－galactopyranoside)
　　0.01mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5)　　　　　　　 10mL
　　1%蛋白胨水(PH7.5)　　　　　　　　　　　　　30mL
制法：將ONPG溶于緩沖液內，加入蛋白胨水，以過濾法除菌，分裝于10mm×75mm試管，每管0.5mL，用橡皮塞塞緊。
試驗方法：自瓊脂斜面上挑取培養物1滿環接種，于36±1℃培養1～3h和24h觀察結果。如果β－半乳糖苷酶產生，則于1～3h變黃色，如無此酶則24h不變色。