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硅魚精子DNA的制備

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-07-06
    (1)在50ml滅菌聚乙烯管中加入1g鮭精DNA,加入15ml DEPC水使其浸泡5min至2h;
  (2)加入2.5ml 2mol/L HCl,室溫放置,DNA形成白色沉淀,充分振搖至沉淀物相互纏繞在一起,用吸頭尖端使之形成一球團狀(2~3min);
  (3)加入5.0ml 2mol/L的NaOH。搖動小管使DNA懸浮、溶解,將小管置50℃15min助溶;
  (4)用DEPC水將混合物稀釋至175ml(總體積),充分混合,注意確保管內已無顆粒狀;
  (5)加入20ml/l 1mol/L的Tris-HCl緩沖液(pH7.4);
  (6)用2mol/L的HCl滴定至DNA溶解pH為7.0~7.5;
  (7)用無菌微孔濾膜過濾液體,去除顆粒。260nm測定溶液的OD值,方法是:取20μl DNA液混合于980μl水中,混勻后測定,吸收值乘以50即為DNA濃度(μg/ml);
  (8)制備好的DNA液儲于-20℃備用,用前取出凍融后煮沸。
 
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