1．取單價(jià)特異性抗酶血清10ml，1.5×104r/min(4℃)離心20min，吸取上清。

2．于上清液中滴加酶溶液(0.5mg/ml)直至不再產(chǎn)生沉淀,靜置1h，1.5×104r/min離心20min。

3．將沉淀物用冷生理鹽水125ml洗三次，每次1.5×104r/min離心20min。

4．于冰浴下，將沉淀物懸混于4ml HRP(2mg/ml)中。

5．在pH計(jì)監(jiān)測下，邊攪拌邊加0.1Mol/L或0.01Mol/L HCl至pH 2.3。此時(shí)沉淀已全部溶解，1.5×104r/min離心20min。

6．吸取上清，用0.1Mol/L NaOH調(diào)pH至7.4。

7．量體積，加入1/10容量的0.075Mol/L醋酸鈉和0.15Mol/L醋酸銨的等量混合液。

8．逐滴加入等體積的100%飽和硫酸銨，攪拌20min。1.5×104r/min離心20min。

9．將沉淀物用50%飽和硫酸銨洗1次，同樣離心。

10．將沉淀物懸混于5ml蒸餾水中，以pH6.75緩沖鹽水透析3天，每天換水1次。(緩沖鹽水由1.35×104ml生理鹽水, 25ml 1.5Mol/L醋酸鈉和75ml 2Mol/L醋酸銨配成)。

11．1.5×104r/min(4℃)離心20min，吸取上清，于OD280nm和OD403nm測定,計(jì)算IgG和酶含量及克分子比值。

12．按0.1ml分裝，-20℃保存。

13．應(yīng)用時(shí)從低溫冰箱中取出,立即在37℃水浴中融化。