一、滅菌前準備
 
1、所有需經滅菌的物品首先要清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用紙包裝嚴密，如用金屬筒應將上面氣孔打開。
 
2、裝培養基的三角瓶塞好棉塞，用紙包好，試管蓋好蓋，注射器須將管芯抽出，用紗布包好。
 
二、裝放
 
1、大型高壓蒸氣鍋：放置滅菌物品不應超過鍋內容積的80%，物品應放置鍋內擱架上或鐵絲筐中。
 
2、手提式高壓鍋：將物品分別包扎好，直接放入消毒筒內，物品之間不能過擠。
 
三、設備檢查
 
1、檢查門的開關是否靈活，橡皮圈有無損壞，是否平整。
 
2、壓力表蒸氣排盡時是否停留在零位，關好門和蓋，通蒸氣或加熱后，觀察是否漏氣，壓力表與溫度計所標示的狀況是否吻合，管道有無堵塞。
 
3、對有自動電子程序控制裝置的滅菌器，使用前應檢查規定的程序，是否符合于進行滅菌處理的要求。
 
四、滅菌處理
 
手提式高壓鍋或立式壓力蒸氣滅菌器的使用應按下列步驟進行：
 
1、手提式高壓鍋在主體內加入3L清水，立式高壓鍋加水16L（重復使用時應將水量補足，水變混濁需要更換）。
 
2、手提式壓力鍋將頂蓋上的排氣管插入消毒桶內壁的方管中（無軟管或軟管銹蝕破裂的滅菌器不得使用）。
 
3、蓋好頂蓋擰緊，勿使漏氣；通上電源，并打開頂蓋上的排氣閥放出冷氣（水沸騰后排氣10～15min）。
 
4、關閉排氣閥，使蒸氣壓上升到規定要求，并維持規定時間（按滅菌物品性質與有關情況而定）。
 
5、達到規定時間后，對需干燥的物品，待壓力恢復到零時，即可打開排氣閥，自然冷卻至60℃后開蓋取物，如為液體物品，不要打開排氣閥，而應立即將鍋去除熱源，待自然冷卻，壓力恢復至零，溫度降到60℃以下再打開蓋取物，以防止突然減壓液體劇烈沸騰活容器爆破。
 
五、滅菌溫度與時間
 
壓力蒸氣滅菌鍋滅菌溫度與時間見下表：
 
物品
滅菌時間min
115℃
121℃
不含糖等耐熱培養基
 
15
含糖類等耐熱培養基
15-20
 
染菌培養物
 
30
器械器皿
 
30
 
六、滅菌處理
 
滅菌后物品，按正常情況已屬無菌，從滅菌器中取出應仔細檢查，以免再度污染。
 
1、物品取出，隨即檢查包裝的完整性，若有破壞或棉塞脫掉，不可作為無菌物品使用。 
2、取出的物品，如為包裝有明顯的水浸者，不可作為無菌物品使用。 
3、培養基或試劑等，應檢查是否符合達到滅菌后的色澤或狀態，未達到者應廢棄。 
4、取出的物品掉落在地或誤放不潔之處，或沾有水液，均視為受到污染，不可作為無菌物品使用。 
5、取出的合格滅菌物品，應存放于貯藏室或防塵柜內，嚴禁與未滅菌物品混放。 
6、凡屬合格物品，應標有滅菌日期及有效期限。 
7、每批滅菌處理完成后，記錄滅菌品名、數量、溫度、時間、操作者。