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原代細胞骨架的染色方法

放大字體  縮小字體 發布日期:2013-08-29  來源:實驗室資訊網
核心提示:微絲的顯示方法步驟: 1. 用PBS液漂洗蓋片培養的原代細胞3次,每次30s; 2. 用2%的甲醛/PBS液固定原代細胞3min; 3. 用0.5
 微絲的顯示方法步驟:
      1.  用PBS液漂洗蓋片培養的原代細胞3次,每次30s;
      2.  用2%的甲醛/PBS液固定原代細胞3min;
      3.  用0.5%的三硝基甲苯/PBS處理3次,每次10min;
      4.  PBS漂洗3次;
      5.  用羅丹明(rhodamine)標記的鬼筆環肽(phalloidin)(1:10)室溫中反應15min;
      6.  PBS漂洗3次;
      7.  60%甘油+熒光防淬劑封片;
      8.  熒光顯微鏡觀察;
 
 微管的顯示方法:
      1.  用PBS液漂洗蓋玻片的原代細胞3次,每次30s;
      2.  在室溫中用3%甲醛/PBS固定20min;
      3.  用PBS液再漂洗3次,每次1min,最后用濾紙吸干多余的PBS液;
      4.  投入冷丙酮中(-10—-20℃)7min;
      5.  用PBS漂洗3次,每次1min,最后用濾紙吸干多余的PBS液;
      6.  向直徑6cm的干凈碟皿中央滴一滴濃度為0.1—0.2mg/ml的一級抗微管蛋白抗體,令小蓋片細胞面向下扣在抗體液上,覆以皿蓋,于37℃溫箱中放置45min—1h;
      7.  向碟皿內勻速緩慢滴加PBS,令蓋片浮起在液面,用鑷子夾出,按步驟3處理;
      8.  向干凈碟皿中央滴一滴濃度為0.1—0.2mg/ml的熒光標記的二抗,其后操作按步驟6進行;
      9.  按步驟7和3操作;
      10. 滴pH8.5的90%的甘油/PBS少許于載玻片上,把小蓋片的原代細胞面覆在大蓋片上;
      11. 將蓋片置于熒光顯微鏡下觀察;
 
編輯:songjiajie2010

 
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